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延邊大學(xué)成功克隆我國(guó)首例紅色熒光轉(zhuǎn)基因五指山小型克隆豬

2012年07月10日

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6月25日,,我校尹熙俊教授課題組成功克隆出國(guó)內(nèi)首例單體紅色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因五指山小型豬,代孕母豬順利產(chǎn)下4頭小豬,,紫外燈照射下全部具有紅色熒光特征,,在可見(jiàn)光下肉眼也清晰可辨。

本項(xiàng)研究受吉林省留學(xué)回國(guó)人員科技創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)優(yōu)秀類,、吉林省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)項(xiàng)目資助,。項(xiàng)目負(fù)責(zé)人為我校“吉林省轉(zhuǎn)基因動(dòng)物與胚胎工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室”主任,、博士生導(dǎo)師尹熙俊教授,,此次成功克隆的紅色熒光轉(zhuǎn)基因五指山小型豬為國(guó)內(nèi)首例。此項(xiàng)研究達(dá)到了國(guó)際同類先進(jìn)水平,,研究所建立的轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)平臺(tái),,為進(jìn)一步開(kāi)展異體器官移植及治療性克隆的研究奠定了基礎(chǔ)。此前,,日本明治大學(xué)于2008年克隆了帶有紅色熒光蛋白的橙紅色(Kusbira-Orange)大白豬,,中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究所于2011年克隆了包括櫻桃紅(TdTomato)紅色熒光蛋白等四色熒光長(zhǎng)白豬,全身表達(dá)紅色熒光蛋白的五指山小型豬未見(jiàn)報(bào)道,。

紅色熒光蛋白簡(jiǎn)稱RFP,,其基因所產(chǎn)生的蛋白質(zhì),在紫外波長(zhǎng)范圍的光線激發(fā)下,,會(huì)發(fā)出現(xiàn)紅色熒光,。由于具有自發(fā)熒光等特征,,在分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。RFP作為為一種報(bào)告分子,,在檢測(cè)蛋白表達(dá),、蛋白和細(xì)胞熒光示蹤、研究蛋白質(zhì)之間相互作用和構(gòu)象變化中,,起到了重要作用,。本項(xiàng)研究中采用的mRFP1是DsRed的一種單體變種,能夠快速成熟,,激發(fā)與發(fā)射波長(zhǎng)長(zhǎng),。克服了DsRed成熟緩慢,,在體內(nèi)形成四聚體,,組織分布不均等問(wèn)題,。本研究中所采用的單體紅色熒光蛋白PCX- mRFP1表達(dá)載體是上海復(fù)旦大學(xué)吳曉輝教授,,于2011年6月贈(zèng)送給我校轉(zhuǎn)基因動(dòng)物與胚胎工程省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的,尹熙俊教授及其科研團(tuán)隊(duì)經(jīng)過(guò)大量復(fù)雜的實(shí)驗(yàn),,將其結(jié)構(gòu)重新構(gòu)建為PCR-mRFP1-neoR,,從而增強(qiáng)了其對(duì)新霉素(neomycin)的抗藥基因,并應(yīng)用于體細(xì)胞核移植生產(chǎn)紅色熒光轉(zhuǎn)基因五指山小型豬的研究,。

五指山小型豬是我國(guó)特有的,、具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的高度近交小型豬,具有體型小,、性成熟早,、遺傳穩(wěn)定、適應(yīng)性強(qiáng)等諸多特性,,基因序列與人類相近在90%以上,,其血型類似人類O型血,血液生理生化指標(biāo),、各組織臟器對(duì)藥物的代謝與人類相似,。目前,五指山小豬已應(yīng)用于藥學(xué),、畜牧,、獸醫(yī)學(xué),尤其用于人類比較醫(yī)學(xué)諸多試驗(yàn),。

紅色熒光轉(zhuǎn)基因五指山小型豬的克隆成功為追蹤豬組織,、細(xì)胞和器官在受者體內(nèi)存活和機(jī)能狀況提供了重要標(biāo)識(shí),這種克隆豬將成為異種移植研發(fā)的理想動(dòng)物模型,,并將為人類器官移植的研究及各類動(dòng)物模型培育,、人源化豬器官移植開(kāi)發(fā)應(yīng)用研究提供科學(xué)依據(jù),。

新聞鏈接:1998年-2008年期間,尹熙俊先后在韓國(guó)國(guó)立慶尚大學(xué)校獸醫(yī)科大學(xué)攻讀博士學(xué)位,、日本近畿大學(xué)動(dòng)物發(fā)生學(xué)研究所從事博士后研究,,主要研究方向是動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)。2003年,,他在韓國(guó)首次成功研發(fā)體細(xì)胞克隆豬,;2007年,成功克隆出世界首例轉(zhuǎn)基因紅色熒光貓,。同年,,尹熙俊回國(guó),擔(dān)任延邊大學(xué)動(dòng)物遺傳育種與繁殖學(xué)科主任,、動(dòng)物胚胎工程研究所所長(zhǎng),,作為項(xiàng)目負(fù)責(zé)人,他先后承擔(dān)國(guó)家農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因新品種培育重大專項(xiàng)項(xiàng)目抗口蹄疫轉(zhuǎn)基因豬新品種培育,、延邊大學(xué)“211工程”三期重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目“動(dòng)物胚胎工程技術(shù)研究與產(chǎn)業(yè)化”,、延邊州科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目,肉牛品種“延黃?!斌w細(xì)胞克隆技術(shù)研究等重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目,。尹熙俊帶頭建立的“延邊大學(xué)一萬(wàn)級(jí)潔凈實(shí)驗(yàn)室”,于2010年被批準(zhǔn)為“吉林省轉(zhuǎn)基因動(dòng)物與胚胎工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室”,,該實(shí)驗(yàn)室于2011年10月成功克隆了“五指山小型豬”,。

可見(jiàn)光下的小豬

紫外燈照射下的小豬

紫外燈照射下的小豬

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